ПТР, же полимераздык чынжыр реакциясы, ДНК ырааттуулугун күчөтүү үчүн колдонулган ыкма.Аны биринчи жолу 1980-жылдары жасаган иштери үчүн 1993-жылы химия боюнча Нобель сыйлыгын алган Кари Муллис иштеп чыккан.ПТР молекулярдык биологияда төңкөрүш жасап, изилдөөчүлөргө кичинекей үлгүлөрдөн ДНКны көбөйтүүгө жана аны деталдуу изилдөөгө мүмкүндүк берди.
ПТР – бул термикалык циклерде, реакция аралашмасынын температурасын тез өзгөртө алган машинада ишке ашкан үч этаптуу процесс.Үч кадам - денатурация, күйдүрүү жана узартуу.
Биринчи этапта, денатурацияда, эки тизмектүү ДНК эки тилкени чогуу кармап турган суутек байланыштарын үзүү үчүн жогорку температурага чейин ысытылат (көбүнчө 95°C).Мунун натыйжасында эки бир катарлуу ДНК молекуласы пайда болот.
Экинчи этапта, күйдүрүү, температураны 55°Cге чейин түшүрүп, праймерлердин бир саптуу ДНКдагы толуктоочу ырааттуулукка кошулушуна мүмкүндүк берет.Праймерлер - максаттуу ДНКдагы кызыкчылыктын ырааттуулугуна дал келүү үчүн иштелип чыккан ДНКнын кыска бөлүктөрү.
Үчүнчү этапта, узартууда, температура Taq полимеразага (ДНК полимеразанын бир түрү) праймерлерден ДНКнын жаңы тилкесин синтездөөсүнө мүмкүндүк берүү үчүн 72°Cге чейин көтөрүлөт.Так полимеразасы ысык булактарда жашаган жана ПЦРде колдонулган жогорку температурага туруштук бере алган бактериядан алынган.
ПТРдин бир циклинен кийин, натыйжада максаттуу ДНК ырааттуулугунун эки көчүрмөсү пайда болот.Бир нече цикл үчүн үч кадамды кайталоо менен (адатта 30-40), максаттуу ДНК ырааттуулугунун көчүрмөлөрүнүн санын экспоненциалдуу түрдө көбөйтүүгө болот.Бул башталгыч ДНКнын кичинекей көлөмү да миллиондогон, атүгүл миллиарддаган копияларды чыгаруу үчүн күчтөндүрүлүшү мүмкүн дегенди билдирет.
ПЦР изилдөө жана диагностикада көптөгөн колдонмолорго ээ.Генетикада гендердин жана мутациялардын функциясын изилдөө үчүн, криминалистикада ДНКнын далилин талдоо үчүн, инфекциялык ооруларды диагностикалоодо козгогучтардын бар-жоктугун аныктоо үчүн жана пренаталдык диагностикада түйүлдүктөгү генетикалык бузулууларды аныктоо үчүн колдонулат.
ПТР ошондой эле бир катар вариацияларда колдонууга ылайыкташтырылган, мисалы, сандык ПТР (qPCR), бул ДНКнын көлөмүн өлчөөгө мүмкүндүк берет жана РНК ырааттуулугун күчөтүү үчүн колдонулушу мүмкүн болгон тескери транскрипциялык ПТР (RT-PCR).
Анын көптөгөн колдонмолоруна карабастан, ПТР чектөөлөрү бар.Ал максаттуу ырааттуулукту жана ылайыктуу праймерлердин дизайнын билүүнү талап кылат жана реакция шарттары туура оптималдаштырылбаса, катага учурашы мүмкүн.Бирок, кылдат эксперименталдык долбоорлоо жана аткаруу менен ПЦР молекулярдык биологиядагы эң күчтүү куралдардын бири бойдон калууда.
Посттун убактысы: 22-февраль 2023-ж